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Illumina HiSeqTM 2000高通量测序平台

Hiseq 2000测序通量可达600Gb/run,一次运行可独立测试16个样品(或混合样本),是Illumina公司2010年推出的一款新的高通量测序仪。凭借Illumina久经考验且广泛采用的可逆终止法边合成边测序试剂,再加上创新的制造工艺,HiSeq 2000实现了行业最高的测序产量和最快的数据产生速率。

HiSeq 2000的测序原理和Genome Analyzer相同,采用稳定的可逆终止法边合成边测序技术。该技术使用4种含有末端阻断基团和不同荧光信号的碱基进行模板互补链的合成,不仅确保了测序的高精确性和高顺序性,而且排除了由重复序列和同聚物导致的测序错误。

在光学系统和制造工艺方面,HiSeq 2000在Genome Analyzer的基础上进行了全面改进和提升。光学系统采用2个激光源对Flowcell进行扫描,并使用4台照相机对4种碱基分别进行记录,大幅度减少了不同碱基之间的信号干扰,提高了测序系统的准确度。同时,HiSeq 2000使用了新颖的双表面成像技术,增加了Flowcell的有效面积,从而提高测序产量和降低成本。

测序原理

Hiseq 2000技术是基于DNA单分子簇的边合成边测序技术,和专有的可逆终止化学反应原理。测序时将基因组DNA的随机片段附着到光学透明的玻璃表面(即Flow cell),这些DNA片段经过延伸和桥式扩增后,在Flow cell上形成了数以亿计Cluster,每个Cluster是具有数千份相同模板DNA的单分子簇。然后利用带荧光基团的四种特殊脱氧核糖核苷酸,通过可逆性终止的SBS(边合成边测序)技术对待测的模板DNA进行测序。这种新方法确保了高精确度和真实的一个碱基接一个碱基的测序,为同聚物和重复序列的测序提供了一个很好的解决方案。

应用范围

基因组de novo测序,基因组重测序,转录组测序,小RNA测序,ChIP-Seq测序,甲基化测序等。


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